ⅠNယူကလစ်အက်ဆစ်iမိတ်ဆက်
Nucleic acid ကို deoxyribonucleic acid (DNA) နှင့် ribonucleic acid (RNA) ဟူ၍ ခွဲခြားထားပြီး ၎င်းတို့တွင် RNA ကို ribosomal RNA(rRNA)၊ messenger RNA(mRNA) နှင့် ၎င်း၏ မတူညီသော လုပ်ဆောင်ချက်များအရ RNA(tRNA) လွှဲပြောင်းပေးပါသည်။DNA သည် အဓိကအားဖြင့် nucleus၊ mitochondria နှင့် chloroform တို့တွင် အဓိကစုစည်းနေပြီး RNA သည် cytoplasm တွင် အဓိကအားဖြင့် ဖြန့်ဝေပါသည်။မျိုးရိုးဗီဇဖော်ပြခြင်း၏အခြေခံပစ္စည်းအနေဖြင့်၊ နူကလိစ်အက်ဆစ်ထုတ်ယူခြင်းသည် မော်လီကျူးဇီဝဗေဒသုတေသနနှင့်လက်တွေ့မော်လီကျူးရောဂါရှာဖွေခြင်းများတွင် အလွန်အရေးကြီးသောအခန်းကဏ္ဍမှပါဝင်ပါသည်။nucleic acid ထုတ်ယူခြင်း၏ အာရုံစူးစိုက်မှုနှင့် သန့်ရှင်းစင်ကြယ်မှုသည် နောက်ဆက်တွဲ PCR၊ sequencing၊ vector တည်ဆောက်မှု၊ အင်ဇိုင်းအစာခြေခြင်းနှင့် အခြားစမ်းသပ်မှုများကို တိုက်ရိုက်အကျိုးသက်ရောက်မည်ဖြစ်သည်။
Ⅱ Nucleic acid ထုတ်ယူခြင်းနှင့် သန့်စင်ခြင်းနည်းလမ်း
① Phenol/chloroform ထုတ်ယူနည်း
Phenol/chloroform ထုတ်ယူခြင်းသည် နမူနာများကို ကုသရန် မတူညီသော အော်ဂဲနစ်အပျော်ရည် နှစ်မျိုးကို အဓိကအားဖြင့် အသုံးပြုကာ ရေအဆင့်ရှိ DNA အခြေပြု နျူကလိစ်အက်ဆစ်ကို ပျော်ဝင်စေခြင်း၊ အော်ဂဲနစ်အဆင့်ရှိ lipid နှင့် အဆင့်နှစ်ဆင့်ကြားရှိ ပရိုတင်းများကို အဓိကအသုံးပြုသည့် ဖီနော/ကလိုရိုဖောင်ထုတ်ယူခြင်းအတွက် ရှေးရိုးနည်းလမ်းတစ်ခုဖြစ်သည်။ဤနည်းလမ်းသည် ကုန်ကျစရိတ်သက်သာခြင်း၊ သန့်ရှင်းမှုမြင့်မားပြီး ကောင်းမွန်သောအကျိုးသက်ရောက်မှု၏ အားသာချက်များရှိသည်။အားနည်းချက်တွေကတော့ ရှုပ်ထွေးပြီး လည်ပတ်ရတာကြာပါတယ်။
② Trizol နည်းလမ်း
Trizol နည်းလမ်းသည် RNA ထုတ်ယူမှုအတွက် ရှေးရိုးနည်းလမ်းတစ်ခုဖြစ်သည်။Trizol နည်းလမ်းကို chloroform ဖြင့် centrifugation ပြုလုပ်ပြီးနောက်တွင် ရေ၀င်သောအဆင့်နှင့် အော်ဂဲနစ်အဆင့်အဖြစ် ပိုင်းခြားထားပြီး RNA ကို aqueous အဆင့်တွင် ပျော်ဝင်ကာ ရေကို EP ပြွန်အသစ်သို့ လွှဲပြောင်းပေးကာ isopropanol ပေါင်းထည့်ပြီးနောက် မိုးရေကိုရရှိကာ အီသနောသန့်စင်မှုပြုလုပ်သည်။ဤနည်းလမ်းသည် တိရိစ္ဆာန်တစ်ရှူးများ၊ ဆဲလ်များနှင့် ဘက်တီးရီးယားများမှ RNA ထုတ်ယူရန်အတွက် သင့်လျော်သည်။
③ Centrifugal ကော်လံသန့်စင်ရေးနည်းလမ်း
Centrifuge ကော်လံသန့်စင်သည့်နည်းလမ်းသည် အထူးဆီလီကွန်မက်ထရစ်စုပ်ယူမှုပစ္စည်းများမှတစ်ဆင့် DNA ကို စုပ်ယူနိုင်သော်လည်း RNA နှင့် ပရိုတင်းတို့သည် ချောမွေ့စွာဖြတ်သန်းနိုင်ပြီး၊ ထို့နောက် nucleic acid ပေါင်းစပ်ရန် ဆားနိမ့် PH မြင့်မားသောဆား၊ ဆားနိမ့် PH တန်ဖိုးမြင့်သော အက်ဆစ်ကို ခွဲထုတ်ရန်နှင့် သန့်စင်ရန်အတွက် PH value elution ကိုအသုံးပြုပါ။အားသာချက်များမှာ သန့်စင်သောအာရုံစူးစိုက်မှုမြင့်မားခြင်း၊ တည်ငြိမ်မှုမြင့်မားခြင်း၊ အော်ဂဲနစ်ပျော်ဝင်မှုမလိုအပ်ခြင်း၊ ကုန်ကျစရိတ်သက်သာခြင်းတို့ဖြစ်သည်။အားနည်းချက်မှာ ၎င်းကို centrifuged အဆင့်ဆင့်၊ လည်ပတ်မှုအဆင့်များ ပိုမိုလုပ်ဆောင်ရန် လိုအပ်သည်။
④ သံလိုက်ပုတီးနည်း
သံလိုက်ပုတီးစေ့နည်းလမ်းသည် ဆဲလ်တစ်ရှူးနမူနာကို lysate မှတစ်ဆင့် ခွဲထုတ်ရန်၊ နမူနာအတွင်းရှိ နျူကလိစ်အက်ဆစ်ကို ထုတ်လွှတ်ပြီးနောက် နျူကလိစ်အက်ဆစ်မော်လီကျူးများကို သံလိုက်ပုတီးစေ့၏မျက်နှာပြင်ပေါ်တွင် အထူးစုပ်ယူထားပြီး ပရိုတင်းနှင့် သကြားကဲ့သို့သော အညစ်အကြေးများ ကျန်ရစ်နေချိန်တွင်၊ အရည်။ဆဲလ်တစ်ရှူးများကို ခွဲထုတ်ခြင်း အဆင့်များအားဖြင့် သံလိုက်ပုတီးစေ့များကို နျူကလိစ်အက်ဆစ်ဖြင့် ပေါင်းစပ်ခြင်း၊ နူကလိစ်အက်ဆစ်ဆေးကြောခြင်း၊ နူကလိစ်အက်ဆစ် ဖောက်ပြန်ခြင်း စသည်တို့ဖြင့် သန့်စင်သော nucleic acid ကို နောက်ဆုံးတွင် ရရှိခဲ့သည်။အားသာချက်များမှာ ရိုးရှင်းသော လည်ပတ်မှု နှင့် ခြေလှမ်း centrifugation မလိုအပ်ဘဲ အချိန်တို အသုံးပြုခြင်း ဖြစ်သည် ။၎င်းတွင် နည်းပညာလိုအပ်ချက်နည်းပါးပြီး အလိုအလျောက်နှင့် အစုလိုက်အပြုံလိုက် လည်ပတ်မှုကို သိရှိနိုင်သည်။သံလိုက်ပုတီးစေ့နှင့် နျူကလိယအက်ဆစ်တို့၏ သီးခြားပေါင်းစပ်မှုသည် ထုတ်ယူထားသော နူကလိစ်အက်ဆစ်ကို အာရုံစူးစိုက်မှုနှင့် သန့်စင်မှုမြင့်မားစေသည်။အားနည်းချက်ကတော့ လက်ရှိပေါက်ဈေးက အတော်လေးဈေးကြီးပါတယ်။
⑤ အခြားနည်းလမ်းများ
အထက်ပါနည်းလမ်းလေးမျိုးအပြင် ဆူပွက်အက်ကွဲခြင်း၊ စုစည်းထားသော ဆားနည်းလမ်း၊ anionic ဆပ်ပြာနည်းလမ်း၊ ultrasonic နည်းလမ်း နှင့် enzymatic နည်းလမ်း စသည်တို့ ပါရှိပါသည်။
Ⅲ nucleic acid ထုတ်ယူခြင်း အမျိုးအစား
Foregene တွင် ကမ္ဘာ့ထိပ်တန်း Direct PCR ပလပ်ဖောင်း၊ double-column RNA Isolation platform (DNA-only + RNA only) ရှိသည်။အဓိကထုတ်ကုန်များတွင် DNA/RNA သီးခြားခွဲထုတ်ကိရိယာများ၊ PCR နှင့် Direct PCR ဓာတ်ပစ္စည်းများ မော်လီကျူးဓာတ်ခွဲခန်းဓာတ်ခွဲခန်းများ ပါဝင်ပါသည်။
① စုစုပေါင်း RNA ထုတ်ယူမှု
စုစုပေါင်း RNA ထုတ်ယူမှုနမူနာများတွင် သွေး၊ ဆဲလ်များ၊ တိရိစ္ဆာန်တစ်ရှူးများ၊ အပင်များ၊ ဗိုင်းရပ်စ်များ စသည်တို့ ပါဝင်ပါသည်။ RT-PCR၊ ချစ်ပ်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း၊ in vitro ဘာသာပြန်ခြင်းတွင် အသုံးပြုနိုင်သည့် စုစုပေါင်း RNA ၏ သန့်စင်မှုနှင့် မြင့်မားသောစူးစိုက်မှုတို့ကို ရရှိနိုင်သည်။ မော်လီကျူးပုံတူပွားခြင်း၊ Dot Blot နှင့် အခြားစမ်းသပ်မှုများ။
Foregene နှင့်သက်ဆိုင်သည်။RNA Isolation Kits
တိရစ္ဆာန်စုစုပေါင်း RNA သီးခြားခွဲထုတ်ကိရိယာ--တိရစ္ဆာန်တစ်ရှူးအမျိုးမျိုးမှ သန့်ရှင်းစင်ကြယ်ပြီး အရည်အသွေးမြင့် စုစုပေါင်း RNA ကို လျင်မြန်ထိရောက်စွာ ထုတ်ယူပါ။
ဆဲလ်စုစုပေါင်း RNA သီးခြားခွဲထုတ်ကိရိယာ--သန့်စင်ပြီး အရည်အသွေးမြင့် RNA ကို အမျိုးမျိုးသော ဆဲလ်များမှ ၁၁ မိနစ်အတွင်း ရရှိနိုင်သည်။
Plant Total RNA Isolation Kit--polysaccharide နှင့် polyphenol ပါဝင်မှုနည်းသော အပင်နမူနာများမှ အရည်အသွေးမြင့် စုစုပေါင်း RNA ကို အမြန်ထုတ်ယူပါ။
Viral RNA Isolation Kit-- ဗိုင်းရပ်စ် RNA ကို ပလာစမာ၊ သွေးရည်ကြည်၊ ဆဲလ်ကင်းစင်သော ခန္ဓာကိုယ်အရည်များနှင့် ဆဲလ်ယဉ်ကျေးမှု supernatants ကဲ့သို့သော နမူနာများမှ လျင်မြန်စွာ ခွဲထုတ်ပြီး သန့်စင်ပါ။
② မျိုးရိုးဗီဇ DNA ထုတ်ယူခြင်း။
မျိုးရိုးဗီဇ DNA ထုတ်ယူခြင်းနမူနာများတွင် မြေ၊ မစင်၊ သွေး၊ ဆဲလ်များ၊ တိရိစ္ဆာန်တစ်ရှူးများ၊ အပင်များ၊ ဗိုင်းရပ်စ်များ စသည်တို့ ပါဝင်ပါသည်။ Genomic DNA ထုတ်ယူမှုကို အင်ဇိုင်းအစာခြေခြင်း၊ DNA စာကြည့်တိုက်တည်ဆောက်မှု၊ PCR၊ ပဋိပစ္စည်းပြင်ဆင်မှု၊ Western blot hybridization ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှု၊ မျိုးဗီဇချစ်ပ်ပြား၊ မြင့်မားသော၊ -throughput sequencing နှင့် အခြားသော စမ်းသပ်မှုများ။
Foregene နှင့်သက်ဆိုင်သည်။DNA သီးခြားခွဲထုတ်ကိရိယာများ
တိရစ္ဆာန်တစ်ရှူး DNA သီးခြားခွဲထုတ်ကိရိယာ--တိရစ္ဆာန်တစ်ရှူးများ၊ ဆဲလ်များ စသည်တို့ကဲ့သို့သော အရင်းအမြစ်များစွာမှ မျိုးဗီဇ DNA ကို လျင်မြန်စွာ ထုတ်ယူခြင်းနှင့် သန့်စင်ခြင်း။
သွေး DNA Midi Kit (1-5ml)-- အရည်အသွေးမြင့် genomic DNA ကို ဆန့်ကျင်သော သွေး (1-5ml) မှ လျင်မြန်စွာ သန့်စင်ပါ။
Buccal Swab/FTA ကတ် DNA သီးခြားခွဲထုတ်ကိရိယာ-- buccal swab/FTA ကတ်နမူနာများမှ အရည်အသွေးမြင့် မျိုးဗီဇ DNA ကို လျင်မြန်စွာ သန့်စင်ပါ။
DNA Isolation Kit ကိုစိုက်ပါ။-- အပင်နမူနာများမှ အရည်အသွေးမြင့် မျိုးဗီဇ DNA ကို လျင်မြန်စွာ သန့်စင်ပြီး (ပိုလီဆက်ဆာခရိုက်များနှင့် ပိုလီဖီနောအပင်နမူနာများ အပါအဝင်)
③ Plasmid ထုတ်ယူခြင်း။
Plasmid သည် DNA ပြန်လည်ပေါင်းစည်းခြင်းအတွက် ယေဘုယျအားဖြင့် ဆဲလ်များအတွင်းရှိ သေးငယ်သော မော်လီကျူး DNA တစ်မျိုးဖြစ်သည်။ပလတ်စမစ်ထုတ်ယူခြင်းနည်းလမ်းမှာ RNA ကိုဖယ်ရှားရန်၊ ဘက်တီးရီးယားမျိုးရိုးဗီဇ DNA မှ ပလတ်စမစ်များကို ခွဲထုတ်ရန်နှင့် သန့်စင်သောပလတ်စမစ်များရရှိရန် ပရိုတင်းနှင့် အခြားအညစ်အကြေးများကိုဖယ်ရှားရန်ဖြစ်သည်။
အထွေထွေ Plasmid Mini Kit- အသွင်ပြောင်းခြင်းနှင့် အင်ဇိုင်းအစာခြေခြင်းကဲ့သို့သော ပုံမှန် မော်လီကျူလာဇီဝဗေဒ စမ်းသပ်မှုများအတွက် အရည်အသွေးမြင့် ပလတ်စမစ် DNA ကို လျင်မြန်စွာ သန့်စင်စေသည်
④ အခြားထုတ်ယူမှုအမျိုးအစားများ၊ miRNA ထုတ်ယူခြင်း စသည်တို့။
တိရစ္ဆာန် miRNA သီးခြားခွဲထုတ်ကိရိယာ-- တိရစ္ဆာန်တစ်ရှူးများနှင့် ဆဲလ်အမျိုးမျိုးမှ 20-200nt miRNA၊ siRNA၊ snRNA သေးငယ်သော RNA အပိုင်းအစများကို လျင်မြန်စွာနှင့် ထိရောက်စွာ ထုတ်ယူပါ။
Ⅳ nucleic acid ထုတ်ယူမှုနှင့် သန့်စင်မှုရလဒ်အတွက် လိုအပ်ချက်များs
① nucleic acid ၏ မူလဖွဲ့စည်းပုံ ခိုင်မာမှုရှိစေရန်။
② ပရိုတိန်းများ၊ သကြားများ၊ lipid နှင့် အခြား macromolecules များ၏ ဝင်ရောက်စွက်ဖက်မှုကို လျှော့ချပါ။
③ နျူကလိစ်အက်ဆစ်နမူနာများတွင် အင်ဇိုင်းကို ဟန့်တားနိုင်သည့် အော်ဂဲနစ်ပျော်ရည် သို့မဟုတ် သတ္တုအိုင်းယွန်းများ၏ ပြင်းအား မြင့်မားမှု မရှိသင့်ပါ။
④ DNA ထုတ်ယူသောအခါတွင် RNA နှင့် အခြားသော nucleic acid ညစ်ညမ်းမှုကို ဖယ်ရှားသင့်ပြီး အပြန်အလှန်အားဖြင့်၊
တင်ချိန်- နိုဝင်ဘာ ၂၄-၂၀၂၂
